總抗氧化能力檢測試劑盒A015-2)
使用說明書
僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
第1版(2016年04月修訂)
[預期應用]
本試劑盒利用ABTS法測血清、血漿、組織勻漿,細胞,細胞上清中總抗氧化能力(T-AOC)。
[試劑盒內容]
試劑 | 數量(96T) | 試劑 | 數量(96T) |
Reagent 1 | 1×20ml | Reagent 4 | 1×0.2ml |
Reagent 2 | 1×1ml | Reagent 5 | 1×0.1ml |
Reagent 3 | 1×0.5ml | 說明書 | 1 |
[需自備的設備及試劑]
405-425nm濾光片的酶標儀
[試劑盒的儲存及有效期]
1. Reagent 1:緩沖液溶液, -20oC可保存6個月。
2. Reagent 2:ABTS原溶液, -20oC可保存6個月, 需避光保存。
3. Reagent 3:H2O2溶液, -20oC避光可保存6個月。
4. Reagent 4:過氧化物酶溶液,-20oC避光可保存6個月。
5. Reagent 5:10mM Trolox溶液, -20oC可保存6個月, 需避光保存。
[試劑準備]
1. 試劑3溶液配制:將雙蒸餾水(DWW)稀釋至原來體積的1000倍。
2. ABTS溶液制備:混合試劑1、試劑2和3溶液,比例為76:5:4,按需求量配置ABTS溶液。ABTS溶液應在沒有光照的室溫下保存,在30分鐘內使用。
3. 試劑4溶液制備:用試劑1稀釋試劑4至其原始體積的10倍。試劑4溶液應在使用前按所需量配制。
[標本處理]
1. 血漿/血漿等液體樣本
預處理:直接檢測。注意,制備血漿樣品,不推薦使用EDTA作為抗凝劑。
2. 組織樣本
預處理:準確稱量樣品,按比例加入生理鹽水,如1g樣品加入9g生理鹽水。在冰上勻漿,于4oC,12000 rpm/min 離心5min ,取上清液用于實驗。
3. 細胞
預處理:收集不少于100萬個細胞,加入200μL預冷磷酸鹽緩沖液。通過均漿或超聲處理破細胞,于4℃、12000 rpm/min離心5min,取上清液用于實驗。
注意:對于組織樣本和細胞,需檢測總蛋白濃度。建議使用IS003 BCA蛋白定量檢測試劑盒測定蛋白質濃度。
[操作步驟]
操作表
空白 | 標準 | 樣本 | |
雙蒸水(μl) | 10 | ||
Trolox 溶液 (μl) | 10 | ||
樣本 (μl) | 10 | ||
試劑4溶液 (μl) | 20 | 20 | 20 |
ABTS 溶液 (μl) | 170 | 170 | 170 |
室溫反應6分鐘,在414nm波長測量各孔O.D.值。 |
注:建議用雙蒸水將Trolox 溶液稀釋至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM,繪制標準曲線。
[實驗原理]
ABTS在適當的氧化劑作用下氧化成綠色的ABTS·+,在抗氧化物存在時,ABTS·+的產生會被抑制,在 405nm或 734nm測定ABTS·+的吸光度即可測定并計算出樣品的總抗氧化能力。Trolox是一種VE的類似物,具有和VE相近的抗氧化能力,用作其它抗氧化物總抗氧化能力的參考。例如,Trolox的總抗氧化能力為 1,相同濃度情況下,其它物質的抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相比的倍數來表示。
[下載]
MSDA