無血清293細胞培養基
使用說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
第1版（2016年04月修訂）
[關聯信息]
無血清293細胞培養基適用于懸浮培養條件下的HEK293細胞（如293-F，293-T，Expi-293F等）的高密度生長和瞬時轉染表達。無血清293細胞培養基含有細胞生長所需的全部營養成份，無需添加任何添加物即可使用。無血清293細胞培養基的基本信息如下表所示：
外觀： | 澄清透明紅色液體 |
滲透壓： | 275±15 mOSM |
pH： | 6.9-7.4 |
無菌檢測： | 無菌 |
內毒素： | <5 EU/mL |
[制品內容]
編號 | 名稱 | 規格 |
IS91-1 | 無血清293細胞培養基 | 100ml |
IS91-2 | 無血清293細胞培養基 | 2*500ml |
[儲存及有效期]
2-8℃避光保存，有效期一年。
[使用方法]
以下步驟僅供參考
（一）細胞馴化
1）直接馴化
大部分情況下，培養于其他培養基中的細胞，可以直接適應無血清293細胞培養基，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養基即可。
2）漸進式馴化
注意：選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化
①在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長穩定，當細胞密度達到2x106 cells/ml后進行傳代，傳代細胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL，5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與無血清293細胞培養基的比例為75:25；
②將細胞置于37℃，5% CO2，轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養；
③當細胞密度3-4天后達到3x106 cells/ml且細胞活率>90%，傳代時5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與無血清293細胞培養基的比例為50:50，細胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如細胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養基，加入80%的5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與無血清293細胞培養基比例為75:25的混合培養基，繼續培養；
④重復步驟③逐步增加無血清293細胞培養基所占的比例（5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與無血清293細胞培養基的比例為25:75至10:90）直到100%的無血清293細胞培養基；
⑤經過在100%的無血清293細胞培養基中的幾次傳代培養，傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×106 cells/mL，細胞存活率大于90%，這說明細胞已經完全適應了無血清293細胞培養基。之后進行細胞的傳代培養時，細胞的起始密度可以降到0.3×106cells/mL，一般傳代2-3次后再進行轉染實驗。
注意: 一般細胞馴化過程中，前三代細胞的狀態可能不是很好，但一般從第四代開始狀態會有改善。
（二）細胞傳代
1）取細胞培養樣品，人工或儀器測定細胞密度以及活率；
2）計算傳代所需的細胞用量，建議起始細胞密度為0.2-0.4×106 cells/mL。建議復蘇的細胞至少培養兩代后再用于其他用途。傳代培養體積建議15-20 mL（100 mL的培養瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養瓶）；
3）將細胞置于37℃，5%CO2，轉速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養，3-4天傳代一次。
細胞轉染在無血清293細胞培養基中，采用商業化轉染試劑（例如ExpiFectamine? 293 Transfection Kit）或PEI可以實現對HEK293細胞的高效轉染。
[注意事項]
1、取液或者分裝需在超凈工作臺，防止污染物進入；
2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作并嚴格按照實驗室安全操作手冊進行。
