SABC試劑盒
使用說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
第1版（2016年04月修訂）
關聯信息
SABC（Strept Avidin Biotin-peroxidase Complex Method）即鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復合物技術，是一種顯示組織和細胞中抗原分布的免疫組化染色方法。鏈霉親和素（Strept avidin）是一種從鏈霉菌屬細菌 Streptomyces avidinii中純化獲得的四聚體蛋白。生物素為含硫的雜環單羧酸，通過其羧基與蛋白質的氨基結合，從而可標記抗體。一分子鏈霉親和素可以高度特異性地與四分子生物素結合，兩者之間的親和力極為強烈。同時，由于鏈霉親和素等電點低，對組織和細胞的非特異吸附很低，具有低的免疫組化背景。SABC大約可形成上百個左右的過氧化物酶和數十個左右的鏈霉親和素所構成的復合物,從而有很強的放大作用。SABC法具有高敏感性，低背景和操作簡便的優點。本試劑盒適用于免疫組織化學方法以顯示待測抗原的分布，適用于常規石蠟包埋切片、冰凍切片，培養固定的細胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等。
制品內容
| 名稱 | 規格 | 成份及用途 |
| 正常豚鼠血清封閉液 | 10mL | 用于組織切片的封閉 |
| 二抗 | 0.2mL(50×) | 生物素標記的豚鼠抗兔IgG |
| SABC | 0.2mL(50×) | 鏈酶親和素-過氧化物酶復合物 |
儲存及有效期
所有試劑4℃保存,有效期1年。
自備試劑
1、粘片劑 APES或Poly-L-Lysine。
2、0.02M PBS（pH7.2-pH7.6)：Na2HPO4·12H2O 7g， NaH2PO4·2H2O 0.5g，NaCl 9g，溶于1L蒸餾水中。
3、0.01M枸櫞酸鹽緩沖液：枸櫞酸三鈉(C6H5Na3O7·2H2O) 3g，枸櫞酸(C6H8O7·H2O) 0.4g，溶于1L蒸餾水中。
4、DAB顯色試劑盒。
石蠟切片免疫組化染色操作步驟
1、載玻片的處理：可選擇APES或Poly-L-Lysine對已清洗的載玻片進行處理，室溫干燥或60℃烤箱烘烤一小時；
2、石蠟切片，脫蠟至水；
3、用蒸餾水或PBS配置新鮮的3% H2O2室溫孵育5-10分鐘，以滅活內源性過氧化物酶的活性；
4、蒸餾水洗3次；
5、抗原修復：根據待檢測的抗原，選擇適當的方法；
石蠟切片電爐煮沸抗原修復操作方法：將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0），電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10分鐘后，反復1-2次。冷卻后PBS（pH 7.2-7.6）洗滌1-2 次。
石蠟切片高壓抗原修復操作方法：將切片浸入0.01M 枸櫞酸鈉緩沖液（pH 6.0），淹沒切片，蓋上鍋蓋，當壓力鍋開始慢慢噴氣時（約加熱5-6分鐘后），計時21-分鐘，然后將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫后，取下氣閥，打開鍋蓋，取出切片，蒸餾水洗后，PBS（pH 7.2-7.6）洗滌3次。
酶消化處理：用0.1%的胰蛋白酶作消化液，消化時間為 37℃，10-40分鐘，主要用于細胞內抗原的顯示。也可用0.4%的胃蛋白酶，消化時間為37℃，30-180分鐘，主要用于細胞間質抗原的顯示。
6、滴加正常豚鼠血清封閉液，室溫20分鐘。傾去血清，勿洗；
7、滴加適當稀釋的一抗（兔IgG），37℃ 1小時左右或 20℃ 時2小時左右，也可4℃過夜；
8、PBS（pH 7.2-7.6）洗2分鐘，3次；
9、加生物素化抗兔 IgG，20-37℃ 20分鐘。PBS（pH 7.2-7.6）洗2分鐘×3次；
10、滴加試劑 SABC，20-37℃ 20分鐘。PBS（pH 7.2-7.6）洗5分鐘×4次；
11、DAB 顯色：使用 DAB 顯色試劑盒。取顯色液 A，B，按說明書步驟進行混勻，根據標本大小，取適當體積加至切片。室溫顯色，顯微鏡下觀察顯色反應，時間一般在5-10分鐘之間。達到合適著色強度時（陽性較強，背景較低），即可用蒸餾水洗滌切片,終止反應；
12、蘇木素輕度復染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。
注意事項
1、一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗濃度和延長孵育時間；背景過高時，可降低一抗濃度和縮短孵育時間。如在SABC反應之后，DAB 顯色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBS（pH 7.2-7.6）洗滌切片4次，單純PBS 洗2次，然后DAB顯色。
2、熱修復抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（PH 6.0）；也可以使用PBS、TBS等多種緩沖液。
3、脫蠟不徹底，容易出現非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規H.E脫蠟分開。
4、如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含內源性生物素含量豐富的組織切片，需要進行封閉的特殊處理。
5、不得使用過期的試劑盒，不同批號間的試劑盒也不能交叉混用。
警告：DAB為可疑致癌物，請采取必要的防范措施。
