Protein-A/G純化柱
使用說明書
僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
第1版(2016年04月修訂)
關聯信息
蛋白A(Staphylococcal Protein A)是一種金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質,能與哺乳動物IgG的Fc區結合。采用重組表達的Protein A,將Protein A與溴化氫活化的顆粒狀瓊脂糖凝膠偶聯制成Protein A預裝柱,能夠特異性地結合多種免疫球蛋白的Fc區段。
Protein A預裝柱可用來純化不同來源的抗體及不同亞型的抗體,并在免疫共沉淀實驗中捕獲免疫復合物。本產品使用了多位點交聯技術,穩定性好、特異性高并具有廣譜結合力,每毫升基質可特異性結合5-10毫克抗體。
產品組分
名稱 | 規格 |
Protein A預裝柱 | 5ml |
產品說明書 | 1份 |
保存條件
經常使用4℃保存,長期保存加甘油放置于-20℃,有效期一年。
運輸條件
低溫冷藏運輸
注意事項
抗體純化柱可以多次反復使用,但應當避免同一支純化柱純化不同的抗體,因為抗體和柱子之間結合緊密,酸洗脫并不能完全洗去結合上的免疫球蛋白,將產生交叉反應。
操作步驟
1、取Protein A柱平衡至室溫,用 10倍柱體積的PBS洗滌平衡層析柱;
2、含抗體的血清或其它體液高速離心后,將上清與等體積2×PBS緩沖液混合,調整pH以及離子濃度后,緩慢加入層析柱;
3、用10倍柱體積以上的PBS洗滌,至流出液無蛋白檢出;
4、加入2-5倍柱體積0.1 M檸檬酸(pH 2.7)或者0.1 M甘氨酸(pH 3.0),收集洗脫液;
5、洗脫后的抗體加入飽和Na2HPO4溶液進行中和;
6、濃縮洗脫液到所需體積,加入50%甘油-20℃保存;
7、層析柱中Protein
A柱使用后需要及時處理,酸洗脫抗體以后,使用10倍柱體積PBS洗柱平衡到中性,20%乙醇溶液充分洗滌后,封閉上下兩端,保存在4℃。
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